15 Mart 2013 Cuma

Etin Histolojik Muayenesi



Histolojik Muayene
Amaç: Bir et ürününde kasaplık gövde etleri, yağ ve müsaade edilen miktardaki bağ dokusu dışında diğer doku ve organların katılıp katılmadığının tespit edilmesi amacıyla yapılır.
Prensip: Bir et ürün önce formolde 1 gün tespit edilir, dereceli alkol ve ksilen serilerinden geçirildikten sonra parafin bloklara gömülür. Mikrotom yardımı ile parafin bloklardan kesit alınarak lam üzerine konur, lamelle kapatılır. Hematoksilen eozin ya da trikrom boya yöntemleri ile bu lameller boyanır ve daha sonra mikrostopta incelenir.
Numune alma: Genel şüpheli et ürünü 2-3 cm lik kare şeklinde kesilir ve doku takip kaseti içine konur.
Histolojik Doku Takip Cetveli:
Pazartesi                                 Numune %10 luk formolde 1 gece bekletilir
Salı                                         9.00-17.00      Akarsuda bekletme
17.00-9.0                 %70 Alkolde 1 gece
Çarşamba                               9.00-11.00      %80 Alkolde bekletme (2h)              
                                               11.00-14.00    %96 Alkolde bekletme (3h)
                                               14.00-9.00      %100 Alkolde 1 gece bekletme
Perşembe                                9.00-10.00      Ksilen I de bekletme (1h)
                                               10.00-11.00    Ksilen II de bekletme (1h)
                                               11.00-12.00    60 oC de Parafin I de bekletme (2h)
                                               12.00-14.00    60 oC de Parafin II de bekletme (2h)
14.00-15.00    Parafin blokların gömülmesi (30dk)
Blok dibe iyice yapışsın yüzeyde kalmasın
15.00-17.00    Deepfrizde bekletme (Kesit alana kadar deepfrezde saklanır. Alınmayacaksa oda ısısında saklanabilir.)
Cuma                                      9.00-11.00      Kesit alma işlemleri (45 oC su banyosunu)                11.00-12.00    Lama yapıştırılan kesitlerin parafinleri 60 oC lik  
                        etüvde 1 h de eritilir.
14.00-17.00    Boyama işlemleri (Trikrom boyama, HxE boyama)
Pazartesi                                 Mikroskobik değerlendirme ve Rapor yazımı

Boyaların hazırlanması


Crossman's Trichrome
 
Solutions

Solution A

0.3
g

2.0
g
Acetic acid

1.0
mL
Water

100
mL
Thymol

0.06
g (a small crystal)
Solution B
Phosphomolybdic acid

1.0
g
Water

100
mL
Solution C

either
or


2.0
g
   

1.0
g
Acetic acid

2.0
mL
   
Acetic acid

1.0
mL
Water

100
mL
   
Water

100
mL
Solution D





Acetic acid

1.0
mL





Water

100
mL







Hematoksilen Eozin Boyama

Boya maddeleri:       Eosin Y (Carlo Erba 446634)
                                   Hemotoxylin cryst (K26696402)
  

Boyama Yöntemleri

1. Crossman Tricroma Boyama


Ksilol  1                      10dk
Ksilol  2                      10dk
%100 alkol (etanol)    2dk
%96  alkol                  2dk
% 80 alkol                  2dk
%50  alkol                  2dk
Distile su                    2dk
Boya A                       1dk
Distile su                    2dk
Boya B                       kollajenlerin rengi gidene kadar
Distile su                    2dk
Boya C                       5dk
Distile su                    2dk
Boya D                       diferensiye olana kadar
Distile su                    2dk
%50  alkol                  2dk
% 80 alkol                  2dk
%96  alkol                  2dk
%100 alkol (etanol)    5dk
Ksilol 1                       10dk
Ksilol 2                       10dk

Ksilolden çıkınca ıslakken lam üzerine cam bagetle1 damla entellan damlatılır. Lamel 30 derece açı ile üzerine kapatılır. Üzerine kurşun ağırlık konur.
Entellanı küçük bir kaba koy büyük şişede donabilir.

Tüm bu solusyonlar şalelerin içinde yer alır.

Değerlendirme:

Nuclei
-
black
Erythrocytes
-
yellow
Cytoplasm
-
red
Collagen
-
blue or green

  
2. Hematoksilen Eozin Boyama

Ksilen I                                  5dk (İlk ksilen parafini eritmek için)
Ksilen II                                 5dk
%100 alkol                             5dk
%96 alkol                               5dk
%80 alkol                               5dk
Distile su                                5dk (suyu sakın unutma yoksa boya almaz)
Hematoxylin                          10dk
Çeşme suyunda yıkama         2dk
Asit-alkol                               daldırma
NaCo3                                               daldırma
Eozin                                      2-3dk
%80 alkol                               daldırıp hemen çıkart
%96 alkol                               daldırıp hemen çıkart
%100 alkol                             daldırıp hemen çıkart
Alkolu kurut                           Fön makinası ya da açık havada
Ksilen I                                  Daldırma (Parlaklık vermek için)
Ksilen II                                 Daldırma
Ksilenden çıkar çıkmaz ıslakken lamele 1 damla entellan damlar lamı yapıştır.



Hiç yorum yok:

Yorum Gönder